Pruebas serológicas para el virus del dengue

Ensayo de inmunoadsorción enzimática para la captura de anticuerpos IgM (MAC-ELISA)

Descripción de la prueba

• La prueba del dengue MAC-ELISA se usa para la detección cualitativa de anticuerpos IgM contra el virus del dengue.

• La MAC-ELISA se basa en la captura de anticuerpos IgM humanos en micropocillo usando anticuerpos contra la IgM humana, a lo que luego se añade antígenos del virus del dengue. Los antígenos que se usan para este ensayo se derivan de las proteínas de la envoltura de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV-1-4).

Cómo y cuándo usar la prueba

• A medida que el sistema inmunitario combate la infección, los anticuerpos IgM contra el virus del dengue son detectables a partir de 4 a 5 días luego de la aparición de los síntomas y hasta por 3 meses.

• La combinación de una prueba de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) y una prueba de anticuerpos IgM generalmente proporciona un resultado de diagnóstico durante los primeros 1 a 7 días de la enfermedad. Una segunda muestra recolectada más de 7 días después de la aparición de los síntomas puede apoyar un diagnóstico de infección por el virus del dengue cuando los resultados de la muestra en fase aguda son negativos o no están disponibles.

• La detección de anticuerpos IgM no es útil para la determinación del serotipo de dengue.

Tipos de muestras

• Suero (preferible)

• Líquido cefalorraquídeo (LCR)

Interpretación de los resultados

• Resultado positivo de IgM: los pacientes con un resultado positivo en la prueba de IgM en una sola muestra se clasifican como pacientes con presuntas infecciones recientes por el virus del dengue.

• Resultado negativo de IgM:
  • Durante los primeros 7 días después de la aparición de los síntomas, los resultados negativos de la prueba de IgM no descartan el diagnóstico de dengue. Durante este periodo, se recomienda la combinación con la NS1 o la NAAT para dengue a fin de confirmar la infección.
  • Los pacientes con resultados negativos de IgM más de 7 días después de la aparición de los síntomas se consideran negativos para una infección reciente por el virus del dengue.

• Seroconversión:
  • Recolectar muestras emparejadas al menos con 7 días de diferencia puede ayudar a identificar o descartar una infección reciente por el virus del dengue. Por ejemplo, recolecte una muestra durante la fase aguda (dentro de los primeros 7 días) y recolecte una segunda muestra durante la fase convaleciente (después de 7 días).
  • La seroconversión se observa cuando se analizan para detectar IgM una muestra de la fase aguda (generalmente recolectada durante los primeros 7 días de la enfermedad) y una muestra de convaleciente (recolectada después de 7 días). Si los resultados de las pruebas cambian de negativo a positivo, se diagnostica una infección de dengue reciente al paciente. Si ambas muestras dan resultados negativos, hay evidencia sólida de que el paciente no tenía infección por el virus del dengue.

• Reactividad cruzada de las pruebas serológicas del dengue:
  • Debido a una posible reactividad cruzada con otros flavivirus, como el virus del Zika y el del Nilo Occidental, podría ser difícil interpretar los resultados de las pruebas de IgM e IgG. Los resultados de las pruebas de anticuerpos IgM positivos, indeterminados y dudosos podrían requerir confirmación mediante una prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) para diferenciar entre los flavivirus. Esto es importante sobre todo si se identifica una infección de dengue en un área donde no se conocen casos de transmisión de dengue o cuando un diagnóstico específico es significativo desde el punto de vista clínico o epidemiológico.

Disponibilidad

Las pruebas serológicas de anticuerpos IgM contra el dengue están disponibles en laboratorios clínicos comerciales y de salud pública. Actualmente, solo un kit de detección de anticuerpos IgM contra el dengue está autorizado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos y disponible a nivel comercial. Las pruebas de IgG están disponibles en algunos laboratorios clínicos. Sin embargo, los CDC no recomiendan las pruebas de IgG en una sola muestra para el diagnóstico de una infección aguda por el virus del dengue.

Prueba de IgG

• Estas pruebas detectan anticuerpos de infecciones pasadas por el dengue u otros flavivirus.

• Las pruebas serológicas mediante ELISA para IgG en una sola muestra no se recomiendan para el diagnóstico de dengue agudo en los pacientes.

• La seroconversión de IgG ocurre cuando los resultados de la prueba de IgG de una persona cambian de negativo a positivo en muestras emparejadas, generalmente recolectadas con 14 días de diferencia. Un aumento mayor de cuatro veces en los valores de IgG entre dos muestras también puede indicar una infección reciente.

• La presencia de anticuerpos IgG sola no confirma una infección reciente, ya que las personas con infecciones secundarias por dengue podrían tener ya IgG por exposición previa, y la reactividad cruzada con anticuerpos de otras infecciones por flavivirus puede dar resultados positivos.

Prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) y pruebas de microneutralización

Descripción de estas pruebas

• La PRNT es un ensayo de laboratorio basado en las interacciones entre los virus y los anticuerpos. Implica exponer las células en un entorno de laboratorio al virus del dengue. Si en la muestra de sangre que se analiza hay anticuerpos neutralizantes, estos reducirán la cantidad de "placas" (áreas de células infectadas) que se forman en el cultivo de células.

• La PRNT puede medir valores de anticuerpos neutralizantes específicos del virus contra el virus del dengue y otros flavivirus del suero de un paciente con infección actual o previa.

• La PRNT se puede usar para determinar la causa de la infección en pacientes con resultados positivos de IgM para los cuales es clínica o epidemiológicamente importante tener un diagnóstico especifico (p. ej., para descartar otros flavivirus como el virus del Zika o el del Nilo Occidental).

• Un solo resultado de la PRNT no puede determinar el momento de la infección porque la presencia de anticuerpos neutralizantes podría deberse a una infección reciente, una infección pasada o a la vacuna.

• Los resultados de la PRNT deben interpretarse junto con los resultados de IgM y los antecedentes de exposición previa y, de manera ideal, con muestras emparejadas de la fase aguda y convaleciente.

• El ensayo de microneutralización se basa en el mismo principio de la PRNT.
  • El ensayo usa una medición colorimétrica o fluorométrica de las cantidades de células infectadas.
  • Este ensayo se elaboró para usar menos reactivos y para hacer pruebas en cantidades mayores de muestras.

Cómo y cuándo usar estas pruebas

• Las pruebas PRNT y de microneutralización se pueden usar cuando se requiere un diagnóstico serológico específico para descartar zika u otros flavivirus de interés (p. ej., en mujeres embarazadas o en casos de importancia clínica y epidemiológica).

• Estas pruebas se usan para confirmar el virus que causa la infección en una muestra positiva para IgM del virus del dengue o del Zika. En algunos casos, puede determinar el serotipo del virus del dengue que causa la infección.

• Para las personas que vivan en áreas con circulación del virus del dengue o del Zika o para los viajeros con exposiciones múltiples de largo plazo, las pruebas PRNT y de microneutralización podrían ser menos útiles para diferenciar entre infecciones por flavivirus actuales o pasadas.

• Los médicos deben comunicarse con los departamentos de salud locales para considerar la PRNT como prueba de confirmación en los casos de resultados positivos de IgM.

Tipo de muestras

• Suero
• LCR

Interpretación de los resultados

• La PRNT que se realiza en una muestra positiva a IgM del dengue que presenta anticuerpos neutralizantes contra un solo serotipo del virus del dengue confirma una infección reciente por ese serotipo.

• La seroconversión de una prueba PRNT negativa en una muestra de fase aguda a una PRNT positiva con anticuerpos contra un solo serotipo del virus del dengue en una muestra de convaleciente confirma una infección reciente por ese serotipo.

• Un aumento de cuatro veces en los valores de la PRNT en muestras emparejadas con anticuerpos contra un virus del dengue indica una infección reciente por ese serotipo.

• Un aumento de cuatro veces en los valores de la PRNT en muestras emparejadas con anticuerpos contra varios flavivirus indica una infección reciente por un flavivirus.

• Una PRNT realizada en una muestra positiva a IgM de dengue que muestra valores de anticuerpos neutralizantes para varios flavivirus (ej., dengue y zika) se clasifica como infección reciente por flavivirus.

• Los casos se pueden reclasificar como otro flavivirus (ej., zika) según los resultados de la PRNT.

• Los resultados negativos en una prueba PRNT o de microneutralización en una muestra positiva a IgM de dengue durante la fase aguda de la enfermedad podría indicar que no se detecta actividad neutralizante. Recolectar una muestra de convaleciente para hacer pruebas de IgM y PRNT puede ayudar a confirmar o descartar una infección en estos casos. Un resultado positivo en la prueba de IgM se sigue considerando presunto en ausencia de otros resultados de pruebas confirmatorios (PRNT, pruebas de microneutralización, NS1 o NAAT).

Disponibilidad

Las pruebas de PRNT y microneutralización se realizan en los CDC o en un laboratorio designado por los CDC (p. ej., un laboratorio que haya demostrado de manera independiente su competencia en la realización de la PRNT al completar un panel de competencia proporcionado por los CDC).

Los laboratorios de salud pública podrían remitir las muestras con resultados positivos de anticuerpos IgM a los CDC para la realización de la PRNT, a fin de confirmar resultados positivos, dudosos o no concluyentes de anticuerpos IgM. Es posible que en algunos países con recursos limitados las pruebas de PRNT y microneutralización no estén disponibles.