Ensayo RT-PCR en tiempo real de los CDC para DENV-1-4

Características del ensayo PCR DENV-1-4

El ensayo PCR DENV-1-4 es una prueba de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) para la detección y tipificación de los virus del dengue en casos presuntos y sintomáticos de dengue. Este ensayo detecta los serotipos 1, 2, 3 y 4 del virus del dengue en el suero o plasma recolectado de pacientes humanos.

El kit del ensayo PCR DENV-1-4 incluye lo siguiente:

• Cebadores de oligonucleótidos y sondas de hidrólisis de doble etiquetado (Taqman®) para la detección cualitativa in vitro de los serotipos 1, 2, 3 o 4 del virus del dengue a partir del suero o plasma recolectado de pacientes humanos con signos y síntomas compatibles con dengue (leves o graves).

• Mezcla de virus como control positivo, que incluye DENV-1 PR433009, DENV-2 PR347662, DENV-3 PR417637 y DENV-4 PR362977 inactivados por calor.

• El control de muestras humanas (HSC, por sus siglas en inglés) es un material de células humanas cultivadas no infecciosas que proporciona una señal positiva en el ensayo y demuestra una recuperación satisfactoria del ARN.

El ensayo PCR DENV-1-4 de los CDC se puede realizar en formato singleplex (cada serotipo del DENV se detecta en una reacción independiente) o en formato multiplex (los cuatro serotipos del DENV se analizan en la misma reacción). Estos dos formatos proporcionan la misma sensibilidad.

Uso previsto

El ensayo PCR DENV-1-4 de los CDC está diseñado para usarse en un instrumento de PCR en tiempo real Applied Biosystems (ABI) 7500 Fast Dx para los siguientes fines:

• Diagnóstico del dengue en suero o plasma recolectado de pacientes con signos y síntomas compatibles con dengue.

• Identificación de los serotipos 1, 2, 3 o 4 del DENV a partir del ARN viral en suero o plasma (citrato de sodio) recolectado de pacientes humanos con dengue.

• Proporcionar información epidemiológica para la vigilancia de los virus del dengue en circulación.

El ensayo PCR DENV-1-4 no está aprobado para la detección sistemática de donantes de sangre o plasma.

Interpretación de los resultados

• Los resultados positivos del ensayo PCR DENV-1-4 indican una infección actual por dengue confirmada.

• Los resultados negativos obtenidos con esta prueba no descartan el diagnóstico de dengue.

• Si la muestra de sangre se toma de un paciente 7 días o más después de la aparición de los síntomas, se recomienda realizar una prueba serológica para detectar anticuerpos IgM contra el DENV.
  • Los anticuerpos IgM contra el virus del dengue pueden permanecer detectables durante 3 meses o más después de la infección.

Distribución de los ensayos

El ensayo PCR DENV-1-4 de los CDC se distribuye a laboratorios con personal con capacitación y experiencia en procedimientos estandarizados de pruebas de diagnóstico molecular y diagnóstico viral, y con equipos y contención de bioseguridad adecuados. Las solicitudes se pueden enviar a DenguePCROrdering@cdc.gov.

Información para laboratorios en los Estados Unidos

Materiales proporcionados en el ensayo PCR DENV-1-4

• Cebadores y sondas específicos para el objetivo

• Controles positivos (una mezcla de estándares DENV-1, 2, 3 y 4 inactivados por calor)

• Control de extracción de muestras humanas (HSC)

Consulte el prospecto para los Estados Unidos aquí (solo versión impresa).

Kit: opciones de mezcla maestra de enzimas para RT-PCR

Reactivo: Invitrogen SuperScript™ III Platinum® Sistema de RT-PCR cuantitativa de un solo paso (sin Rox)*

• Cantidad: 100 reacciones
  • N.° de catálogo: 11732-020
• Cantidad: 500 reacciones
  • N.° de catálogo: 11732-088

Kit: opciones de kit de purificación de ácidos nucleicos

Reactivo: Kit Qiagen QIAamp® DSP Viral RNA Mini e instrumento Qiagen QIAcube**

• Cantidad: 50 extracciones
  • N.° de catálogo: 71904 y 9001292

Reactivo: Kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales Roche MagNA Pure LC*

• Cantidad: 192 extracciones
  • N.° de catálogo: 03 038 505 001

* El rendimiento de la prueba de ensayo PCR DENV-1-4 requiere que solo se usen lotes de reactivos auxiliares calificados con el dispositivo en los Estados Unidos. Cualquier lote que no esté específicamente calificado por la Subdivisión de Dengue de los CDC para su uso con el ensayo PCR DENV-1-4 no es válido para su uso con este dispositivo y podría afectar el funcionamiento del dispositivo.

** El minikit Qiagen QIAamp® DSP Viral RNA (n.° de catálogo 71904) se produce de acuerdo con las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM). Estos kits de extracción de ARN se pueden usar de forma manual o en combinación con el instrumento QIAcube (n.° de catálogo 9001292).

Información sobre el ensayo PCR DENV-1-4 para laboratorios internacionales

Los kit de ensayos PCR DENV-1-4 para laboratorios internacionales están diseñados para la vigilancia del dengue y etiquetados para uso exclusivo de investigación (Research Use Only, RUO).

Materiales proporcionados en el ensayo PCR DENV-1-4

• Cebadores y sondas específicos para el objetivo

• Controles positivos (una mezcla de estándares DENV-1, 2, 3 y 4 inactivados por calor)

• Control de extracción de muestras humanas (HSC)

Consulte el prospecto internacional aquí (solo versión impresa)

Información de contacto, pedidos y asistencia del producto

Para solicitar los kits de ensayos PCR DENV-1-4 y una lista de reactivos auxiliares calificados, así como para obtener asistencia técnica, comuníquese directamente con el equipo de la Subdivisión de Dengue.

Para pedidos y apoyo técnico, envíe un correo electrónico a la siguiente dirección: DenguePCROrdering@cdc.gov.

Incluya la siguiente información en su mensaje:

• Nombre y dirección del laboratorio
• Persona de contacto calificada
• Número de teléfono
• Dirección de correo electrónico
• Dirección para envíos